IV turdagi gripp virusi uchun tovuq embrioni yig'im bulonini quyi oqimda tozalash jarayoni bo'yicha optimallashtirish tadqiqoti (2-qism)

Turli xil ultrafiltratsiyali kontsentratsiya jarayonlarining IV turdagi gripp virusidan tozalangan suyuqlik sifatiga ta'siri.

Gripp virusi konsentrati katta hajmga, past gemagglutinin tarkibiga va yuqori darajadagi aralashmalar va oqsillarga ega, bu esa keyingi qayta ishlashdan oldin ultrafiltratsiya kontsentratsiyasini talab qiladi. Yumshoq, yirik{1}}miqyosdagi ishlab chiqarish konsentratsiyasi uchun ultrafiltratsiya afzal usul hisoblanadi. Tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, 750 kd ichi bo'sh tolalar tizimi kontsentratning ovalbumin miqdorini sezilarli darajada kamaytirishi mumkin, boshqa bir tadqiqot shuni ko'rsatadiki, 1000 kd membrana kapsülleme tizimi parranda grippi kontsentratidagi aralashmalar va oqsillarni sezilarli darajada kamaytirishi mumkin. Keng ko'lamli adabiyotlarni o'rganib chiqqandan va ikkita tez-tez ishlatiladigan ultrafiltratsiya kontsentratsiyasi moslamalarini, 750kd ichi bo'sh tolali tizimni va 1000kd membranani inkapsulyatsiya tizimini solishtirgandan so'ng, operatsion tizimdan tashqari barcha shartlar bir xil bo'lib, sinov natijalari asosida optimal ultrafiltratsiya kontsentratsiyasi jarayoni aniqlandi.

Sinov natijalari 4-9-rasmda ko'rsatilgan. UA1-1 750kd ichi bo'sh tolali tizim yordamida filtrlangan ultrafiltratsiya konsentratining uchta partiyasining o'rtacha ko'rsatkichini, UA1-2 1000kd membrana tizimi yordamida filtrlangan uchta ultrafiltratsiya konsentratining o'rtacha qiymatini anglatadi va hokazo.

Shakl 4. Gripp virusi konsentratining aniqlash natijalari - umumiy protein tarkibi

Shakl 5. Gripp virusi kontsentrati - ovalbumin tarkibini aniqlash natijalari

Shakl 6. Gripp virusi kontsentratining aniqlash natijalari - oqsilni olib tashlashning umumiy darajasi

Shakl 7. Gripp virusi kontsentrati - gemagglyutinatsiya titrini aniqlash natijalari

Shakl 8. Gripp virusi kontsentratining aniqlash natijalari - konsentratsiyasi titri hosili

9-rasm. Gripp virusi kontsentrati - gemagglutinin tarkibini aniqlash natijalari

 

Natijalar gripp virusi konsentratining barcha guruhlarida bakterial endotoksin darajasi 60 EU/ml dan past ekanligini ko'rsatdi. Gripp virusi tuzilishi bilan bog'liq bo'lishi mumkin bo'lgan ovalbumin miqdori, gemagglyutinatsiya titri, gemagglutinin miqdori va konsentratsiya titrining rentabelligida statistik jihatdan sezilarli farqlar yo'q edi. Shu bilan birga, 1000 kDa membrana tizimi bilan davolash gripp V va BY shtammlarining umumiy oqsil miqdorining kamayganini, shuningdek, H3N2 va BY grippi shtammlarining umumiy oqsillarni olib tashlash tezligining pasayishini ko'rsatdi. Bundan tashqari, 1000 kDa membrana tizimi bir xil hajmdagi aniqlangan eritmani konsentratsiyalash uchun kamroq vaqt talab qildi, bu vaqt xarajatlari bo'yicha afzalliklarni namoyish etdi. Shuning uchun 1000 kDa membrana tizimi gripp V shtammlarining gripp virusi kontsentratining ultrafiltratsiya konsentratsiyasi uchun tanlangan.

 

IV turdagi gripp virusining aniqlangan eritmasi sifatiga turli konsentratsiya nisbatlarining ta'siri

Konsentratsiya omili maqsadli oqsilning hosildorligi, kontsentratsiya vaqti va kontsentratsiya tizimining xavfsizligi bilan chambarchas bog'liq bo'lgan tozalashning hal qiluvchi bosqichidir. To'rtta gripp virusi turidan (UA1, UA3, UB1 va UB2) har biridan (UA1, UA3, UB1 va UB2) ultrafiltratsiya konsentratsiyasini o'rganish uchun 1000 kd membrana kapsülleme tizimi tanlandi va har bir L4 eritmasidan ko'p bosqichli tiniqlash uchun doimiy oqim santrifüjlashdan o'tkazildi. Har bir aniqlangan eritma har biri 6 L bo'lgan to'qqizta guruhga bo'lingan va 30, 40 va 50 kontsentratsiya omillari tekshirilgan, har bir omil takroriylik va barqarorlikni tekshirish uchun uch marta takrorlangan. Tegishli yakuniy hajmlar mos ravishda 0,2 L, 0,15 L va 0,12 L edi.

, namunalar umumiy oqsil tarkibini, umumiy oqsilni olib tashlash tezligini, gemagglyutinatsiya titrini, konsentratsiya titrining rentabelligini va gemagglutinin tarkibini sinash uchun olingan. Sinov natijalari 10-14 .-rasmda ko'rsatilgan

 

Shakl 1.0. 4-serotipli gripp virusi kontsentratsiyasining aniqlangan eritmasining turli konsentratsiya nisbatlarida - umumiy oqsil miqdori

Shakl 1.1. IV turdagi gripp virusining tiniqlashtirilgan eritmasi konsentratsiyasining natijalari, turli konsentratsiyalar nisbati - oqsillarni olib tashlashning umumiy darajasi

Shakl 12. IV serotipli gripp virusi aniqlangan suyuqlikning turli konsentratsiya nisbatlarida konsentratsiyadan so'ng aniqlash natijalari - gemagglyutinatsiya titri

1.3-rasm. Turli turdagi gripp virusining tiniqlashtirilgan eritmasi konsentratsiyasining har xil konsentratsiya nisbati - konsentratsiya titri va hosildan keyin kontsentratsiyasi natijalari

Shakl 14. IV turdagi gripp virusining tiniqlashtirilgan eritmasida gemagglutinin tarkibini turli konsentratsiya nisbatlarida konsentratsiyadan keyin aniqlash natijalari.

 

Natijalar shuni ko'rsatdiki, turli xil konsentratsiyalar nisbati uchun pastroq konsentratsiya nisbatlari umumiy oqsil miqdori va umumiy oqsilni olib tashlash tezligini, shuningdek, past gemagglyutinatsiya titrlarini, konsentratsiya titrining hosildorligini va gemagglutinin miqdorini ko'rsatdi. Yuqori konsentratsiya koeffitsientlari bu muammolardan qochishi mumkin edi, lekin ular tizimga yuqori talablarni qo'ydi, tizimning ish bosimini oshirdi va potentsial yo'qotishlarni oshirdi. Bundan tashqari, ortib borayotgan bosim ishlab chiqarish vaqtini ko'paytirishga olib keldi va shu bilan vaqt xarajatlarini oshirdi. Barcha omillarni hisobga olgan holda, 30-40 marta konsentratsiya nisbati optimal bo'ldi.

 

Turli xil tozalash jarayonlarining IV tipdagi konsentrlangan gripp virusi sifatiga ta'siri

Natijalar shuni ko'rsatdiki, Capto Core 700 ni tozalash umumiy protein va ovalbuminni olib tashlashning yuqori ko'rsatkichlarini va umumiy protein va ovalbumin miqdorini kamaytirishni, ammo gemagglutinin miqdori va hosildorligini pastligini ko'rsatdi. Boshqa tomondan, saxaroza zichligi gradienti santrifüjlash yuqori gemagglutinin miqdori va hosildorligiga erishdi. Bundan tashqari, Capto Core 700 gemagglutinin rentabelligi doimiy ravishda 50% dan yuqori bo'lib, saxaroza zichligi gradienti santrifüjlashdan biroz pastroq edi. Biroq, saxaroza zichligi gradientini santrifüjlash tozalashdan keyin dezakarizatsiyani talab qilishi, ko'proq vaqt talab qilish-va katta yo'qotishlarga olib kelishini hisobga olsak, Capto Core 700 afzal ko'rilgan usuldir. Core 700 tozalash usuli IV turdagi konsentrlangan gripp virusi uchun tozalash usuli sifatida ustundir.

Adabiyotlar: Huang, Zhentian. To'rt valentli gripp virusi split vaktsinasi uchun quyi oqim ishlab chiqarish jarayonini optimallashtirish [D]. Shenyang qishloq xo'jaligi universiteti, 2024. DOI: 10.27327/d.cnki.gshnu.2024.001595.