300kd ichi bo'sh tolali ultrafiltratsiya: oyoq va{2}}O/A virusi uchun yuqori-samarador kontsentratsiya va tozalash jarayonining tahlili

Kirish

Oyoq-va{1}}oyoq kasalligi (FMD) — oʻtkir, isitmali va oʻta yuqumli hayvonlar kasalligi boʻlib, oyoq{2}}va{3}}ogʻiz kasalliklari virusi (FMDV) keltirib chiqaradi. Bu virus 70 dan ortiq sezgir turlarga ega bo'lgan tuyoqli{5}} hayvonlarga ta'sir qiladi. U tez tarqaladi va yuqori kasallanish darajasiga ega, odatda cho'chqalar, qo'ylar va qoramollar kabi asosiy chorva mollariga ta'sir qiladi, bu erda kasallanish 100% ga etishi mumkin. FMDV jinsga tegishliOyoq-va-Og'iz virusiMicroRNAviridae oilasidan. Zarrachalar sharsimon, diametri taxminan 27-30 nm, buzilmagan virusli zarralar uchun cho'kish koeffitsienti 146S. Hozirgi vaqtda turli xil FMD vaktsinalari mavjud, ular orasida zaiflashtirilgan jonli virusli vaktsinalar, jonli virus vektorli vaktsinalar, inaktivatsiyalangan vaktsinalar, nuklein kislotali vaktsinalar, sintetik peptid vaktsinalari va subunit vaktsinalar mavjud. Inaktivatsiyalangan FMD vaktsinalari odatda hayvonlarda kamroq nojo'ya ta'sirlarga ega va ko'p valentli vaktsinalar yaxshi immunizatsiya samaradorligini ta'minlaydi, bu ularni Xitoyda FMD oldini olishning asosiy tayanchiga aylantiradi.

Tangensial oqim ultrafiltratsiyasi

Hozirgi vaqtda tangensial oqimli ultrafiltratsiya keng miqyosda oyoq va og'iz kasalliklariga qarshi ko'p valentli inaktiv vaktsinalarni-ishlab chiqarishda tozalash va konsentratsiyalash usuli hisoblanadi. Bu usul nafaqat kerakli konsentratsiya faktoriga erishibgina qolmay, balki ko'p miqdorda begona aralashmalarni ham olib tashlaydi. Tangensial oqim ultrafiltratsiyasi asosan tozalash, kontsentratsiya va filtrlash (desalting va buferni almashtirish) uchun ishlatiladi. Bundan tashqari, u tangensial oqim mikrofiltratsiyasidan foydalangan holda fermentatsiya bulonini yoki hujayra madaniyati muhitini tozalash uchun ham ishlatilishi mumkin, shuning uchun santrifüj yoki birlamchi tozalash o'rnini bosadi.

An'anaviy vertikal filtrlashda katta molekulalar membrana yuzasida to'planishga moyil bo'lib, filtrni yopishadi. Tangensial oqim filtratsiyasi oqimni membranaga parallel ravishda davom ettirishga imkon beradi va bu tiqilib qolish muammosidan qochadi. Tangensial oqim filtratsiyasida erituvchi va membrana orqali o'tadigan membrana g'ovak hajmidan kichikroq moddalar permeat deb ataladi, g'ovak hajmidan kattaroq moddalar esa konsentrat sifatida saqlanadi. Optimallashtirilgan yuvish va filtrlash jarayonlari bilan birgalikda turli o'lchamdagi molekulalarni ajratish va tozalashga erishish mumkin. Ushbu texnologiya arzon narxlardagi, engil ish sharoitlari, qulay tozalash va almashtirish, yuqori membrana o'tkazuvchanlik oqimi tezligi va oddiy operatsiya kabi afzalliklarni taqdim etadi, bu esa uni bioaktiv moddalarni katta-miqyosda kontsentratsiyalash va tozalash uchun ayniqsa mos keladi.

Materiallar va usullar

Natijalar va muhokama

Viruslarni dastlabki tozalash nuqtai nazaridan, ultrafiltratsiya kontsentratsiyasi viruslarni o'z ichiga olmaydi, oqsillar kabi aralashmalar uchun 90% dan ortiq olib tashlash tezligiga erishadi. Hajmi bo'yicha u 10-50 marta yuqori konsentratsiyaga erishishi mumkin, bu keyingi tozalash uchun kuchli yordam beradi. Molekulyar og'irligi 300kd bo'lgan ichi bo'sh tolali ustun tanlangan. Bu gözenek hajmi virusning 85% dan ko'prog'ini saqlagan holda, nopok oqsillarning 90% dan ortig'ini olib tashlashi mumkin. Membrananing maydoni 1600 sm² va o'tkazuvchanligi 2-5 ml/sm² ni tashkil qiladi, bu ultrafiltratsiya konsentratsiyasini samarali vaqt ichida (2 soat ichida) yakunlash imkonini beradi. Batafsil ultrafiltratsiya konsentratsiyasi va tozalash ma'lumotlari 1-jadvalda keltirilgan.

1-jadval. Oyoq va{2}}oyoq kasalliklari antijenlarini (O va A turlari) umumiy aniqlash natijalari

Tozalash usuli haqida fikrlar

Hozirgi vaqtda turli xil tozalash usullari mavjud, biroq bir xil antigen uchun bir xil usulda ham tozalash effekti ko'p sabablarga ko'ra ko'pincha qoniqarsiz bo'ladi, jumladan antigen tavsifi va jarayon parametrlari. Masalan, yuqoridagi molekulyar dizayn yoki fermentatsiya madaniyati tizimlaridagi o'zgarishlar virusning molekulyar tuzilishini o'zgartirishi mumkin, bu esa qoniqarsiz tozalash natijalariga olib keladi. Noto'g'ri tushuntirish usullari xom ashyo narxini yoki heterologik oqsil miqdorini oshirishi mumkin, bu esa quyi oqimdagi tozalash bosimini oshiradi. Noto'g'ri ultrafiltratsiya kontsentratsiyasi, masalan, turli xil ultrafiltratsiya membranalarining teshik o'lchamlari, kontsentratsiya va elutsiya omillari, kirish oqim tezligi, filtrlash tezligi va TMP, past antigen tiklanish tezligiga olib kelishi mumkin. Keng amaliyot shuni ko'rsatadiki, yomon tozalash emlashdan keyin hayvonlarda sezilarli salbiy reaktsiyalarga olib kelishi mumkin, bu esa potentsial o'limga olib keladi.